Estandarización de la doble biomarcación inmunocitoquímica P16/KI-67 en citología convencional para la detección de lesión intraepitelial escamosa de alto grado del cuello uterino

Abstract

Introducción: el ensayo inmunocitoquímico p16/Ki-67 revela la expresión simultánea de estos dos biomarcadores que aparece sólo durante la transformación neoplásica y aumenta el rendimiento de la citología cervical para detectar carcinoma o lesión intraepitelial escamosa de alto grado (LIE-AG) del cérvix. Muy pocos estudios han evaluado esta tinción dual en citología convencional. Objetivo: estandarizar el uso de la tinción dual p16/Ki-67 en extendidos de citología cervical convencional con LIE-AG o lesión de mayor grado, con estudio de biopsia confirmatoria correspondiente. Métodos: se utilizaron frotis de citología procesados mediante técnica convencional. Se realizó una reevaluación para verificar la presencia de células anormales bien conservadas. Las muestras fueron tratadas para remoción del cubreobjetos, decoloración, rehidratación y recuperación de antígenos, y se aplicó el protocolo de tinción de Citología CINtec®PLUS en áreas previamente demarcadas que contenían células morfológicamente alteradas, con diferentes tiempos de incubación de los anticuerpos primarios. Se realizó análisis bivariado mediante Chi-cuadrado y t de Student, para determinar las relaciones entre procesamiento y reactividad en el proceso de tinción, utilizando el software Stata v16. Resultados: se incluyeron 40 extendidos con mediana de almacenamiento de 233 días. No hubo diferencias significativas en la tinción dual p16/Ki-67 en relación con los tiempos de, almacenamiento de la lámina, inmersión en xilol o incubación de anticuerpos primarios, tampoco con el resultado de la citología convencional o el diagnóstico histopatológico. La tinción dual p16/Ki-67 fue positiva en 75% de los extendidos, correspondientes al 75% (27/36) de LIE-AG, 66.6% (2/3) de carcinomas y 100% (1/1) de adenocarcinomas. Conclusión: la tinción dual p16/Ki-67 se puede realizar en citologías cervicales convencionales previamente coloreadas con buenos resultados. Es posible que el abundante material hemático observado en algunos frotis pueda interferir con la doble tinción. Además, la ausencia de doble tinción en algunos casos con LIE-AG/NIC-3 puede deberse a la pérdida de su antigenicidad.

Introduction: the p16/Ki-67 immunocytochemical assay reveals the simultaneous expression of these two biomarkers which appears only during neoplastic transformation and increases the performance of cervical cytology to detect carcinoma or high-grade squamous intraepithelial lesion (HISL) of the cervix. Very few studies have evaluated this dual staining in conventional cytology. Objective: to standardize the use of p16/Ki-67 dual staining in conventional cervical cytology smears with HSIL or a more advanced cervical intraepithelial neoplasia (CIN2+), with a corresponding confirmatory biopsy study. Methods: cytology smears processed by conventional technique were used. A re-evaluation was performed to verify the presence of well-preserved abnormal cells. Samples were treated to remove the coverslip, discoloration, rehydration, and antigen retrieval, and CINtec®PLUS Cytology staining protocol was applied in previously demarcated areas containing morphologically altered cells, with different incubation times of the primary antibodies. Bivariate analysis was performed using Chi-square test and Student's t-test, to determine the relationships between processing and reactivity in the staining process, using Stata v16 software. Results: were included 40 smears with median storage of 233 days. There were neither significant differences in p16/Ki-67 dual staining in relation to slide storage time, xylene immersion, primary antibodies incubation, nor with the results of conventional cytology or histopathological diagnosis. p16/Ki-67 dual staining was positive in 75% of smears, corresponding to 75% (27/36) of HSIL, 66.6% (2/3) of carcinomas, and 100% (1/1) of adenocarcinomas. Conclusions: p16/Ki-67 dual staining can be performed on previously stained conventional cervical cytologies with good results. It is possible that the abundant hematic material observed in some smears could interfere with the dual staining. Furthermore, the absence of dual staining in some cases with HSIL/CIN3 may be due to the loss of its antigenicity.